DNK ligaza — разлика између измена
Садржај обрисан Садржај додат
м reference |
м reference |
||
Ред 98:
DNK ligaze su postale nezamenjiv alat u modernim molekularno-biološkim istraživanjima za generisanje [[Rekombinacije (biologija)|rekombinantnih]] DNK sekvenci. Na primer, DNK ligaze se koriste sa [[restrikcioni enzim|restrikcionim enzimima]] za umetanje [[DNK]] fragmenata, često [[gen]]a, u [[plazmid]]e.
Jedan vitalan, i često problematičan, aspekt izvođenja uspešnih rekombinacionih eksperimenata vezan za ligaciju fragmenata je kontrola optimalne temperature. Većina eksperimenata koristi T4 DNK ligazu (izolovanu iz [[Enterobakterijski fag T4|bakteriofaga T4]]), koja je najaktivnija na 25°-{C}-. Međutim, da bi se izvela uspešna ligacija sa kohezivno-završenim fragmentima ("lepljivim krajevima"), optimalna enzimska temperatura treba da bude balansirana sa [[temperatura topljenja|temperaturom topljenja]] T<sub>m</sub> DNK fragmenata koji se spajaju.<ref name="Current Protocols">{{
Pošto tupo-završeni [[DNK]] fragmenti nemaju kohezivne krajeve, i kontrola optimalne temperature postaje manje važna. Najefikasnija temperatura ligacije je temperatura na kojoj [[Enterobakterijski fag T4|T4]] DNK ligaza optimalno funkcioniše (T4 DNA ligaza je jedina komercijalno dostupna DNK ligaza koja spaja tupe krajeve).<ref name="Current Protocols"/> Iz ovih razloga, većina tupo-završenih ligacija se izvodi na 20-25°-{C}-.
Ред 118:
== Литература ==
* {{Cite book |author=Tabor, Stanley |chapter=DNA ligases |title=Current Protocols in Molecular Biology, Book 1 |year=2001 |publisher=Wiley Interscience|ref=harv}}
== Spoljašnje veze ==
| |||