DNK ligaza — разлика између измена
Садржај обрисан Садржај додат
Нема описа измене |
м исправак мерних јединица (Клајн—Шипка) и козметичке измене |
||
Ред 67:
}}
'''DNK ligaza''' je tip enzima, ({{EC broj|6.5.1.1}}), koji u ćeliji popravlja diskontinuitete u [[DNK]] molekulima.<ref name="AlbertsMolecularBiology4th">{{AlbertsMolecularBiology4th}}</ref><ref>{{cite web |url= http://www.wiley.com/college/pratt/0471393878/student/animations/dna_replication/index.html |title=Essential Biochemistry - DNA Replication }}</ref>
DNK ligaze imaju primenu u [[popravka DNK|popravci]] i [[Replikacija DNK|replikaciji DNK]]. Prečišćene DNK ligaze se koriste u [[kloniranje|kloniranju]] [[gen]]a za spajanje [[DNK]] molekula. DNK ligaze se ekstenzivno koriste u molekularno biološkim laboratorijama u [[genetička rekombinacija|genetičko rekombinacionim]] eksperimentima (pogledajte [[DNK ligaze#Primena u molekularno biološkim istraživanjima|Primena u molekularno biološkim istraživanjima]]).
Ред 93:
DNK ligaze su postale nezamenjiv alat u modernim molekularno-biološkim istraživanjima za generisanje [[Rekombinacije (biologija)|rekombinantnih]] DNK sekvenci. Na primer, DNK ligaze se koriste sa [[restrikcioni enzim|restrikcionim enzimima]] za umetanje [[DNK]] fragmenata, često [[gen]]a, u [[plazmid]]e.
Jedan vitalan, i često problematičan, aspekt izvođenja uspešnih rekombinacionih eksperimenata vezan za ligaciju fragmenata je kontrola optimalne temperature. Većina eksperimenata koristi T4 DNK ligazu (izolovanu iz [[Enterobakterijski fag T4|bakteriofaga T4]]), koja je najaktivnija na 25 °-{C}-. Međutim, da bi se izvela uspešna ligacija sa kohezivno-završenim fragmentima ("lepljivim krajevima"), optimalna enzimska temperatura treba da bude balansirana sa [[temperatura topljenja|temperaturom topljenja]] T<sub>m</sub> DNK fragmenata koji se spajaju.<ref name="Current Protocols">{{Cite book |last=Tabor|first=Stanley|chapter=DNA ligases |title=Current Protocols in Molecular Biology, Book 1 |year=2001 |publisher=Wiley Interscience}}</ref> Ako temperatura ambijenta previsi T<sub>m</sub>, ne dolazi do [[Homologni hromozom|homolognog uparivanje]] lepljivih krajeva zato što visoka temperatura narušava [[vodonična veza|vodonično vezivanje]].<ref name="Current Protocols"/> Što su [[DNK]] fragmenti kraći, to je niži T<sub>m</sub> nivo.
Pošto tupo-završeni [[DNK]] fragmenti nemaju kohezivne krajeve, i kontrola optimalne temperature postaje manje važna. Najefikasnija temperatura ligacije je temperatura na kojoj [[Enterobakterijski fag T4|T4]] DNK ligaza optimalno funkcioniše (T4 DNA ligaza je jedina komercijalno dostupna DNK ligaza koja spaja tupe krajeve).<ref name="Current Protocols"/> Iz ovih razloga, većina tupo-završenih ligacija se izvodi na 20-25 °-{C}-.
Uobičajene kupovno dostupne DNK ligaze su originalno otkrivene u [[Enterobakterijski fag T4|bakteriofagi T4]], ''[[E. coli]]'' i drugim [[bakterija]]ma.
Ред 129:
{{DNK replikacija-lat}}
{{DEFAULTSORT:
[[Категорија:Молекуларна биологија]]
[[Категорија:ДНК репликација]]
| |||