Tečna hromatografija visokih performansi — разлика између измена
Садржај обрисан Садржај додат
мНема описа измене |
|||
Ред 16:
== Način rada ==
Princip rada -{HPLC}--a je forsiranje prolaska analizirane supstance (ili [[smeše|smeše]]) kroz kolonu (cev napunjenu materijalom sitnih čestica, a time i velike površine) pumpanjem tečnosti (mobilna faza) pod visokim pritiskom kroz kolonu. Unosi se mala zapremina uzorka u tok mobilne faze i na osnovu specifičnih hemijskih i fizičkih interakcija, dolazi do različitog zadržavanja komponenata smeše. Vreme zadržavanja zavisi od prirode supstance koja se analizira, stacionarne faze i sastava mobilne faze. Vreme za koje se supstanca eluira (dođe do kraja kolone) naziva se retenciono vreme i one je karakteristično za određenu supstancu. Korištenje visokog pritiska povećava linearnu brzinu i daje komponentama manje vremena za zadržavanje, što poboljšava rezoluciju hromatograma. Koriste se uobičajeni [[rastvarač]]i, čisti ili u bilo kojoj kombinaciji (npr. voda, [[metanol]], organski rastvarači, itd). Voda može sadržavati i neki [[pufer]], kako bi se poboljšalo razdvajanje. Moguće je koristiti i gradijentno eluiranje, što podrazumeva promenu sastava mobilne faze u toku eluiranja.
== Tipovi -{HPLC}--a ==
=== Hromatografija na normalnim fazama ===
Ova metoda koristi [[polarnost|polarnu]] stacionarnu fazu i nepolarnu mobilnu fazu, a koristi se kada je supstanca koja se analizira polarna. Polarna supstanca se adsorbira i zadržava na česticama stacionarne faze. Jačina adsorpcije je veća, što je veća [[polarnost]] supstance, a samim time jeće i vreme zadržavanja. Korištenje polarnijih rastvarača u mobilnoj fazi smanjuje retenciono vreme. Ovaj tip hromatografije je napušten [[1970e|1970-tih]] sa razvojem -{HPLC}--a na obrnutim fazama, zbog slabe reproducibilnosti, usled promjena na česticama stacionarne faze pod uticajem rastvarača.<ref>{{cite book |url=http://www.osti.gov/energycitations/product.biblio.jsp?osti_id=7013902 |year=1987 |title=High performance liquid chromatography |publisher=Wiley |author=Lindsay, S. ; Kealey, D.}} -{from review}- {{cite journal|journal=J. Am. Chem. Soc. |volume=110 |issue=11 |year=1988 |doi=10.1021/ac00162a003|title=Theoretical and experimental foundation for surface-coverage programming in gas-solid chromatography with an adsorbable carrier gas|last1=Hung|first1=L. B.|last2=Parcher|first2=J. F.|last3=Shores|first3=J. C.|last4=Ward|first4=E. H.|pages=1090}}</ref>
=== Hromatografija na obrnutim fazama ===
-{HPLC}- na reverznim fazama (-{RP-HPLC}-) koristi [[polarnost|nepolarnu]] stacionarnu fazu i polarnu mobilnu fazu. Najčešća stacionarna faza je [[silikat]]na, tretirana sa -{RMe<sub>2</sub>SiCl}-, gde je -{R}- alkilna grupa ravnog lanca kao -{C<sub>18</sub>H<sub>37</sub>}- ili -{C<sub>8</sub>H<sub>17</sub>}-. Vreme zadržavanja je duže za manje [[polarnost|polarne]] supstance. Vreme zadržavanja se povećava dodatkom polarnih [[rastvarač]]a u mobilnu fazu a smanjuje se dodatkom hidrofobnih rastvarača. -{RP-HPLC}- funkcioniše na principu [[Hidrofobnost|hidrofobnih]] interakcija, koje su rezultat odbijajućih sila između polarnog [[rastvarač]]a i relativno nepolarne supstance koja se analizira i nepolarne stacionarne faze.
Na brzinu eluiranja utiče -{[[pH]]}-, zbog mogućnosti promene polarnosti supstance. Zbog toga se često u mobilnu fazu dodaju [[pufer]]i. Kolone za -{RP-HPLC}- ne bi trebalo koristiti sa jakim [[Baza (hemija)|bazama]], zbog mogućnosti razgradnje silikatnih čestica.
==Reference==
| |||